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San Felipe Hoy

28 de julio de 2011

La Amplificación Isotérmica Mediada por Lazo

El control de enfermedades infecciosas, depende de un diagnóstico preciso y el tratamiento apropiado de los pacientes que la sufren. En muchos casos, la variabilidad genética intrínseca del agente infeccioso obliga al establecimieto de pruebas diagnósticas específicas para distinguir tal variabilidad;es el caso de la diversidad de especies de Leishmania circulantes en un área determinada , o la tripanosomiasis africana producida por T. gambiense o T. rhodesiense . La amplificación de DNA o RNA mediante la técnica de la reacción en cadena de la DNA polimerasa y sus variantes, constituye una de las metodologías más valiosas en el campo de la medicina clínica. Recientemente, se desarrollo una nueva variante de la técnica de PCR llamada Amplificación Isotérmica Mediada por Lazo. Esta metodología utiliza múltiples iniciadores y condiciones isotérmicas (60-65 °C) para la amplificación de la secuencia blanco, en un tiempo relativamente corto (30 min-1h), utilizando la Bst-DNA polimerasa (Bst-DNApol). LAMP no requiere termociclador para garantizar los ciclos de denaturalización-reasociación para la hibridación de los primers y la actividad de la polimerasa, como ocurre en la PCR. Similar a una reacción de PCR anidada , LAMP requiere de varios primers, 4 a 6, que reconocen y se unen por homología a distintas regiones del blanco.La síntesis de DNA es producto de la actividad de polimerización y desplazamiento de cadena de DNA (5´ ® 3´) por parte de la polimerasa, debido al anclaje permanente de los primers sobre los productos de amplificación que se generan. La reacción genera en corto tiempo una cantidad extraordinaria del producto de amplificación, el cual está representado por una estructura de múltiples lazos con tallos sobre el DNA blanco, dando un aspecto parecido a las flores de un coliflor. El proceso es altamente específico y de una sensibilidad comparable al mejor ensayo de PCR. La observación del producto de amplificación puede hacerse visualmente por turbidez o por cambio de color asociado a reactivos propios de la reacción .Dada la simplicidad se han desarrollado distintos ensayos de alta especificidad, sensibilidad y facilidad de uso en condiciones de campo para el diagnóstico molecular de varios agentes infecciosos, tales como Plasmodium spp. y Trypanosoma spp.

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